پولي ايڪريلامائيڊ جيل اليڪٽروفورسس لاءِ احتياطي تدبيرون

· پولي ايڪريلامائيڊجيل کي ايڪريلامائيڊ مونومر، پوليمرائيزيشن شروع ٿيندڙ مواد، ڪيٽالسٽ، ۽ لوڻ ۽ بفر مرکب جي ساڄي پاسي سان گڏ ڪرڻ گهرجي.

· ايڪريلامائيڊ۽ BIS (N، N '- ميٿيلين ڊبل ايڪريلامائيڊ) مونومر فارم جيل ميٽرڪس آهي.

· امونيم پرسلفيٽ چپڪندڙ پوليمرائيزيشن جي عمل کي شروع ڪري ٿو. گلو جي ٺهڻ لاءِ پاڻي ۾ تيار ڪيل 10٪ امونيم پرسلفيٽ محلول جي ضرورت آهي. گهڻي ڀاڱي معلومات فعال استعمال جي ضرورت کي ظاهر ڪري ٿي. جڏهن ته، 10٪ محلول کي ڪيترن ئي هفتن تائين 4℃ تي رکي سگهجي ٿو بغير ڪنهن خاص سرگرمي جي نقصان جي. 10 ملي ليٽر تائين ٺاهيو ۽ جڏهن گلو گڏ نه ٿئي ته رد ڪريو.

صلاح: جو سيڪڙوايڪريلامائيڊترتيب ڏيڻ ۾ گلو ۽ پروٽين گلو هڪجهڙا نه آهن. جيڪڏهن اڳ ۾ ٺهيل ايڪريلامائيڊ: BIS محلول استعمال ڪري رهيا آهيو، ته پڪ ڪريو ته صحيح بوتل حاصل ڪريو.

· TEMED (N, N, N ', N ' - ٽيٽرا ميٿائل ايٿيلين ڊائيامين) هڪ ڪيٽالسٽ آهي، هڪ ڀوري بوتل ۾، فرج ۾ رکيل آهي. گلو وجهڻ کان اڳ شامل ڪريو.

· اليڪٽروفوريسس ۾ استعمال ٿيندڙ پولي ايڪريلامائيڊ اليڪٽروفوريسس گلاس کي هر دفعي اڳ ۽ پوءِ ڌوئڻ گهرجي. اليڪٽروفوريسس کان پوءِ، گرم صابڻ واري پاڻي ۾ نرم برش ۽ ڪپڙي سان ڌوئو، ڊسٽل ٿيل پاڻي سان ڌوئو ۽ سڪي وڃڻ لاءِ بيهڻ گهرجي.

· نمي ۽ مٽي خالي پوليمر سان ٿي سگهي ٿي. اليڪٽروفورسس کان اڳ، شيشي جي پليٽ کي شيشي جي ڪلينر سان صاف ڪريو ۽ ان کي نرم برش سان صاف ڪريو. ڊسٽل ٿيل پاڻي سان ڌوئو ۽ پيپر وائپ سان چڱي طرح سڪيو. پيپر سان صاف ڪرڻ کان اڳ 70٪ ايٿانول سان ڌوئڻ صاف ڪرڻ ۽ سڪي وڃڻ کي تيز ڪرڻ ۾ مدد ڪري ٿو. ايڪريلامائيڊ جا نمونا لڳاتار شامل ڪريو: BIS، پاڻي، بفر محلول، امونيم پرسلفيٽ، TEMED. چڱي طرح هلايو ۽ فوري طور تي وجھو.

پوليمرائيزيشن کان اڳ پولي ايڪريلامائيڊ کي ڊيگاس ڪرڻ ضروري ناهي. (بلبلن کي هٽائڻ لاءِ ايڪريلامائيڊ کي ويڪيوم ۾ رکيو ويندو هو ڇاڪاڻ ته آڪسيجن پوليمرائيزيشن کي روڪي ٿي.)

افقي گلو پوائنٽ نموني جا ٽوٽڪا.

· هيٺئين دٻي ۾ ڪاري ڪاغذ جو ٽڪرو رکو، ڪارو پس منظر ۾ ڪجهه نموني سوراخ ٺاهڻ لاءِ ته جيئن وڌيڪ واضح طور تي ڏسي سگهجي.
· گلو ٽينڪ سان ڀريل بفر، ڪولائيڊ جي بلڪل مٿان.
جيڪڏهن ڪنڊ تي روشني آهي، بتيون روشن ڪريو، ڪولائيڊ کي روشني ڏيڻ ڏيو. نموني کي پائپٽ ۾ ڪڍو.
· خودڪار پائپٽنگ ڊوائيس استعمال ڪندي.
· 10-200 mu ۾ 1 مائع حرڪت وارو نقطو نموني تي گھڻن نقطن ۾ استعمال ڪري سگھجي ٿو. تمام ننڍڙن نموني سوراخن لاءِ (10μ1 کان گهٽ)، گلو کي ترتيب ڏيڻ لاءِ استعمال ٿيندڙ ڊگهو پائپيٽ هيڊ وڌيڪ آسان آهي.

· پائپٽنگ صرف نموني ۾ ٻڏي وئي، آهستي آهستي هلندڙ سيال کي ساهه کڻڻ سان. نمونو گليسرين سان چپچپا نظر اچي سگهي ٿو، ۽ تيز پمپنگ پائيپٽ جي مٿي ۾ هوا جا بلبل ڪڍي سگهي ٿي.

· نموني پائپٽنگ هيڊ کي ساهه کڻڻ کان پوءِ، پائپ جي ڪنڊ تي يا پيپر کي صاف ڪرڻ سان مائع هيڊ کي قطرن کان ٻاهر منتقل ڪندا. احتياط ڪريو ته نموني کي نه چوسو.

نموني کي نموني جي سوراخ ۾ رکو.

· پائپٽنگ ڊيوائس ٿورو دٻاءُ رکڻ لاءِ، نمونن کي اوور فلو مائع سر کي ٿورو حرڪت ڏيڻ لاءِ.
· بفر ۾ داخل ٿيل پائپٽنگ هيڊ، اسپاٽ هولز کان ٿورو مٿي، مثبت دٻاءُ برقرار رکي ٿو. پائپٽ جي چوٽي کي ننڍڙي سوراخ ۾ داخل ڪري سگهجي ٿو.
· آهستي آهستي ۽ مستقل طور تي نمونا ٻاهر ڪڍو. پائپٽ جي ٽپ پوائنٽ نموني سوراخ جي مٿان رکيل آهي، ۽ نمونو سوراخ ۾ ٻڏي ويندو. نموني کي سوراخ ڀرڻ لاءِ ٻڏڻ ڏيو بجاءِ ان کي اندر ڌڪڻ جي.
· هڪ ڀيرو نموني جو آخري ڦڙو مائع سر سان، مائع ٻئي ٽنگ ڏانهن منتقل ٿيندو، آهستي آهستي مائع حرڪت کي بلند ڪندو، بفر مان ٻاهر نڪري ويندو.

عمودي گلو نموني ڪيئن ڪجي؟

· عمودي گلو پوائنٽ نموني سوراخ شيشي جي ٻن ٽڪرن جي وچ ۾ ٺهيل آهن. تمام پتلي گلو ۾، پائپيٽ هيڊ کي ٻن شيشي جي پليٽن جي وچ ۾ به داخل نٿو ڪري سگهجي. گليسرين تي نظر رکو! پائپيٽ هيڊ کي نموني جي سوراخ تي رکو ۽ نمونو سوراخ ۾ ٻڏي ويندو.
· پوائنٽ نموني کان اڳ، پڪ ڪريو ته پولي پروپيلين ايسل جيل نموني سوراخ جي عمودي نقطي کي صاف ڪيو وڃي. غير پوليمرائزڊ ايڪريلامائيڊ ۽ پاڻي کي ڌوئي ڇڏيو جيڪو نموني سوراخ جي تري ۾ ظاهر ٿي سگهي ٿو. پاڻي نموني سوراخ کي تمام ننڍو ڪري سگهي ٿو. 25ml يا 50ml سرنج ۽ 18-گيج سوئي استعمال ڪريو. اليڪٽروفورسس بفر ۾ وجھو ۽ نموني سوراخ کي احتياط سان فلش ڪريو.
· نموني جي سوراخ کي ڏسڻ ڏکيو ٿي سگهي ٿو، پر ساڳئي وقت، باقي آسان آهي. جيڪڏهن وڌيڪ سوراخ آهن، ته نموني بفر کي بروموفينول نيرو سان جانچي سگهجي ٿو.